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本产品在蛋白两端分别加了核定位信号（NLS），在C端加了EGFP序列。Cas9蛋白与Crispr/Cas9系统的导向RNA（sgRNA）组成一个高度稳定的核糖核蛋白（RNP）复合物。当Cas9带有NLS表达序列时，Cas9-RNP复合体可以在进入细胞后立即定位到细胞核，无需体内转录或翻译。此外，与其他系统相比，Cas9-RNP复合物从细胞中迅速清除，最大限度地减少了脱靶效应。EGFP通过荧光激活细胞排序（FACS），使细胞群富集以进行所需的基因组编辑，显著降低了在基因组编辑应用中单细胞克隆和基因分型的人工和成本。


CRISPR/Cas9是细菌和古细菌在长期演化过程中形成的一种适应性免疫防御系统。Cas9核酸酶是一种RNA引导的内切酶，能催化双链DNA的断裂，这种靶向核酸酶是高精度基因组编辑的有力工具。

• 纯蛋白体系，避免CRISPR基因敲除时引入质粒或病毒干扰；
  
• 蛋白带有EGFP标记，更易进行转染效率判断和细胞富集；
  
• 可显著降低脱靶效应。

• 基于蛋白与sgRNA转染的非病毒载体CRISPR基因敲除；
  
• 基于蛋白与sgRNA转染的非病毒载体CRISPR基因敲入；
  
• sgRNA剪切靶点DNA效率检测，降低体内筛选成本；
  
• 体外剪切靶DNA的特异位点。

图1．Cas9 Nuclease做DNA片段切割活性检测。带有靶位点的DNA片段为1500bp，酶切后的片段为1100bp和400bp。

组分	规格
NLS-Cas9-EGFP Nuclease(1μg/μL)	50μL
10×Cas9 Reaction Buffer	500μL

保存：-20℃

• 经多次柱纯化，SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带，纯度达95%。
  
• 内毒素含量<100EU/mg。
  
• qPCR方法检测无大肠杆菌基因组残留。
  
• 无RNase、核酸内、外切酶污染。

• 按下表加入各成分配制20μL体外切割反应体系：
  

  成分	用量
  dsDNA	200ng
  sgRNA	200ng
  NLS-Cas9-EGFP Nuclease	0.5～1.5μg
  10×Cas9 Reaction Buffer	2μL
  RNase-Free Water	至20μL

  
  注：在反应体系中可添加RNase Inhibitor至1U/μL，防止dsDNA不纯导致sgRNA的降解。
  
• 37℃反应1小时。
  
• 70℃加热10分钟。

货号	名称	说明
JN0065	NLS-Cas9 Nuclease
JN3003	Cas9 D10A Nickase	能在与sgRNA靶序列互补的DNA链上产生切口，从而形成功能性的单链断裂，可以减少意外的脱靶基因修饰。
JN3004	Cas9 H840A Nickase	能在与sgRNA靶序列非互补的DNA链上产生切口，从而形成功能性的单链断裂，可以减少意外的脱靶基因修饰。
JN3005	Cas9(D10A,H840A)Nuclease	为Cas9 D10A和H840A双突变失活酶，具有靶DNA结合活性，但无切割活性，可用于阴性对照等用途。

相关搜索：NLS-Cas9核酸酶(EGFP标记)，NLS-Cas9-EGFP Nuclease